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要点（Key Takeaways）

• 不受胎牝馬とは、繁殖能力のある精液で3回以上交配しても受胎しない牝馬を指します。繁殖牝馬の集団のおよそ5〜10%が、シーズンを空胎（不受胎）で終えます。
• Bojesen教授と Petersen博士によれば、不受胎牝馬の約80%が休眠状態の Streptococcus zooepidemicus 感染——臨床徴候をほとんど示さない隠れた（潜在性の）子宮内膜炎——を抱えています。
• 休眠レンサ球菌は代謝を停止するため、通常の培養では増殖しません。さらに牝馬自身の子宮細胞の中や、子宮内膜の約10mm深部にまで潜むため、通常のスワブでは偽陰性となります。
• 通常のスワブ培養で検出できるのは、陽性牝馬の約3分の1にすぎません。生検培養では約82%（Nielsen 2005）まで上がりますが、bActivateのような活性化培地を用いなければ、休眠レンサ球菌は依然として見逃されます。
• 3つのリスク因子は、それぞれ単独で高い確率（約80%）の休眠感染を示します：12歳以上、3回以上の分娩歴、または子宮内膜炎・流産の既往。いずれか1つで十分です。
• Hagyard の研究（Dr. Kristina Lu、不受胎牝馬 約64頭、2010年〜）：約70%が受胎し、少なくとも32頭が生存産駒を出産しました（一部は妊娠中に売却され追跡不能）。
• Kildangan／Godolphin の研究（Dr. Meta Osborne、不受胎牝馬19頭）：16頭が活性化陽性でペニシリン治療を受け、19頭中14頭が翌年に生存産駒を得ました（平均1.1サイクル）。
• 再活性化研究（活性化陽性19頭）：活性化と、局所＋全身の完全な治療の後、翌サイクルに再び活性化したところ19頭中18頭が無菌（陰性）でした。唯一陽性だった1頭は、全身治療を受けず局所治療のみでした。
• プロトコルは通常の繁殖診療に収まります：子宮からサンプルを採取し、bActivate 10 mlを注入し、約48時間待って再採取・培養します。レンサ球菌が活性化していれば、局所および全身にペニシリンで治療します（3日間）。レンサ球菌はほぼ常にペニシリン感受性です。
• バイオフィルムは子宮内膜表面の細菌コロニーです。アセチルシステイン（粘液溶解剤〈mucolytic〉）で分解しても表面を処置するだけで、組織の深部にある休眠感染には届かないため、「解決の半分にも達しない」とされます。
• 感染は分娩のたびに蓄積するため、研究者らは牝馬が2回以上分娩した段階で、休眠感染の蓄積を防ぐ予防的手段としても活性化を用いています（例：秋に牝馬を休ませる時期に実施）。

はじめに

Martin Hinz: 獣医として、あるいはオーナーとして繁殖牝馬に関わっている方なら、不受胎牝馬にきっと出会ったことがあるでしょう。なんとか受胎させようとしても結果が出ず、大きな落胆に終わる——。もしその答えが、これまで見落としてきた何かにあるとしたら？ 「From Headache to Hope」へようこそ。私は Martin です。今日は、馬の受胎性研究をリードするお二人、Anders Miki Bojesen教授と、馬の専門医 Morten Rønn Petersen博士をお迎えしています。Morten、自己紹介をお願いします。

Petersen博士: ありがとうございます。私は獣医で、長年にわたり受胎性の分野に取り組んできました。獣医学生時代の最終課題が馬の繁殖で、その後、非常に大きな種馬牧場で臨床に携わり、カリフォルニア州デイビスでレジデンシーを、そしてコペンハーゲン大学で博士号を取得しました。そこで Miki と出会い、牝馬の子宮内膜炎について多くの研究を行いました。

Bojesen教授: Anders Miki Bojesen です。コペンハーゲン大学の微生物学教授で、私も獣医ですが、さまざまな動物、とりわけ馬の微生物学と感染症を専門としています。Morten とはいくつものプロジェクトを共同で進めてきました。

不受胎牝馬とは何か

Martin Hinz: 不受胎牝馬とは何でしょうか。

Petersen博士: 明確な定義は、3回交配しても受胎しない牝馬です。私たちが見てきた牝馬の多くは、繁殖能力のある精液で3回以上交配しても受胎しませんでした。私たちの研究は主に感染性子宮内膜炎、とくに慢性で隠れた症例を対象としてきました。こうした牝馬は、シーズンごとに、なかには年々、空胎（不受胎）を繰り返します。

Martin Hinz: オーナーは、そうした牝馬に多額の費用をかけていますね。

Petersen博士: 非常に多額です。こうした牝馬は繁殖専門の獣医に何度もかかり、抗菌薬をはじめとするさまざまな治療を繰り返し受けています。長期にわたり不妊が続く牝馬は非常にコストがかかり、血統が貴重な場合はなおさらです。

Martin Hinz: シーズンを迎える100頭の繁殖牝馬のうち、どれくらいが不受胎牝馬になるのでしょうか。

Petersen博士: 年齢構成にもよりますが、シーズン後に空胎となるのは5〜10%ほどです。

隠れた問題——休眠レンサ球菌

Martin Hinz: オーナーたちは何を見落としているのでしょうか。

Bojesen教授: 繁殖牝馬に関わる人なら、レンサ球菌が感染性子宮内膜炎の主要な原因であることは知っています。しかし多くの人が知らないのは、牝馬がそれと分からないまま感染している場合があるということです。これを私たちは休眠感染、あるいは隠れた感染と呼んでいます。驚くほど多くの牝馬が、簡単には検出できない感染を抱えています。感染が現れて治療し、いったん消えたように見えても、それでも受胎しない——感染が見えないまま残っているからです。

Martin Hinz: 休眠レンサ球菌とは何か、そしてなぜそれほど扱いが難しいのか、説明していただけますか。

Bojesen教授: 通常、レンサ球菌は、たとえば血液寒天培地で一日から翌日にかけてよく増殖します。ところが休眠している一部は代謝速度を落とし、ほとんど活動しません。臨床微生物学の診断の多くは、細菌が分裂・増殖することを前提としています。増殖しなければ、いつものようにサンプルを採って培養しても、結果がまったく出ないことが多く、「何もいない」と結論づけてしまうのです。

Martin Hinz: つまり偽陰性になるわけですね。

Bojesen教授: そのとおりです。さらにあります。初期の研究で、この細菌が牝馬自身の細胞の中に入り込み、粘膜の表層だけでなく子宮内膜の約10mm深部にまで潜んで隠れることが分かりました。レンサ球菌が馬の細胞の表面に近づくと、一種の相互作用（クロストーク）が起こり、細胞が杯のような構造をつくって細菌を取り込み、閉じ込めます。細菌は細胞内の小胞（vacuole）にとどまり、馬の免疫系から長期間隠れ続けます。見つけにくいのも当然です。

Petersen博士: しかも、あちこちの「ポケット」に潜んでいます。右子宮角、左子宮角に感染があっても、臨床症状はごくわずかで、液の貯留も分泌物もありません。探さなければ、見つからないのです。

活性化の仕組み

Martin Hinz: では、どうやって問題を解決するのですか。

Petersen博士: 私たちが発見したのは、こうした細菌の増殖を促す「蘇生因子（resuscitating factor）」です。当社の製品 bActivate を加えると、休眠細菌の増殖が可能になり、促されます。組織の深部のポケットに潜んでいた細菌も、いったん増殖を始めると子宮の表面に出てきて、子宮全体に広がります。そうなれば、子宮からサンプルを採り、代謝的に活発な細菌を回収して培養・同定し、最適な治療を選ぶのは簡単です。

どれほど一般的か、そしてリスク因子

Martin Hinz: その10%の不受胎牝馬のうち、活性化できる休眠感染を抱えているのはどれくらいですか。

Petersen博士: 大規模なデータをまとめると、不受胎牝馬の約80%が、この潜在性子宮内膜炎——休眠レンサ球菌の感染を、品種を問わず抱えています。これは「摩耗（wear and tear）」の問題です。3回以上分娩した牝馬、子宮内膜炎の既往がある牝馬、12歳以上の牝馬に見られます。統計を見ると、これらのリスク因子は1つあれば十分です。

Martin Hinz: つまり、受胎が難しく、12歳の牝馬なら、隠れた感染の確率は80%にもなると。

Bojesen教授: そうです。12歳以上、3回以上の分娩、または子宮内膜炎・流産の既往——いずれか1つで、その牝馬は高確率のカテゴリーに入ります。約12歳が転換点であることは、複数の研究が示しています。

なぜ感染は時間とともに蓄積するのか

Bojesen教授: 牝馬は、最初の妊娠や初回の分娩で感染し得ます。そのとき子宮頸管が開き、下部生殖路の常在菌にさらされるからです。レンサ球菌はその一部です。その時点では牝馬はあらゆる指標で良好なので、軽度の休眠感染があっても妊娠し、産駒を得ることができます。しかし分娩のたびに再びさらされ、菌量が蓄積していきます。3回以上分娩する頃には、感染が子宮内膜を損ないはじめる閾値に達し、加齢と分娩回数の増加とともに子宮内膜の質は低下していきます。

Hagyard の研究

Martin Hinz: Dr. Kristina Lu が率いた、Hagyard Equine Medical Institute での初期の研究について教えてください。

Petersen博士: 初期の頃、私はケンタッキー大学でサバティカルを過ごし、Hagyard の獣医たちに私たちの知見を紹介しました。それがきっかけで、彼らは何年も不妊だった牝馬を含む、選抜した繁殖牝馬のグループで試すことになりました。2010年頃に始めました。その不受胎牝馬の約70%が受胎し、追跡できた大半が産駒を得ました。興味深いのは、これらの牝馬は乾いて見え、臨床症状もなかったのに、活性化後には膿性の分泌物や液が現れ、かなりの量の細菌が回収できたことです。

Martin Hinz: 研究には何頭の牝馬がいたのですか。

Petersen博士: 約64頭の不受胎牝馬で、いずれも Hagyard が受胎させられなかった牝馬です。非常に優れた繁殖チームがすでに集中的な治療を行っていた、高価値の繁殖牝馬でした。

Martin Hinz: その64頭のうち、生存産駒は何頭でしたか。

Bojesen教授: 少なくとも32頭が生存産駒を出産したことが分かっています。一部は追跡不能となり、一部は妊娠5〜6か月——胎子を失うリスクが非常に低くなった段階で売却されました。

なぜ子宮洗浄や灯油では不十分なのか

Martin Hinz: 多くの獣医が、灯油を含むさまざまなもので子宮を洗浄します。なぜそれは長期的に良い方法ではないのでしょうか。

Bojesen教授: これらの洗浄剤は、効くとしても、まったく異なる仕組みで作用します。生理食塩水でさえ子宮内を清浄にし、多少は役立ちます。灯油は粘膜表層を完全に剥ぎ取るので、表層の感染細胞は除去しますが、細菌がなお潜む子宮壁の深部には届きません。つまり刺激が強く、何らかの作用はするものの、組織深部の休眠細菌を除去できる保証はありません。

Petersen博士: 私たちは、不受胎牝馬に灯油が非常によく使われるニュージーランドで研究を行いましたが、頻繁に使われているにもかかわらず、慢性休眠感染の有病率は他地域と同程度でした。灯油は一部の症例では役立つかもしれませんが、根治にはなりません。過去の灯油使用が疑われる癒着や瘢痕組織の症例も見てきました。灯油は石油であり、組織に極めて強い刺激を与え、瘢痕組織を形成するリスクがあります。

バイオフィルムとアセチルシステイン

Martin Hinz: 獣医や牧場、オーナーと話すと、よくバイオフィルムの話を聞きます——「この牝馬はバイオフィルムに問題がある」と。それは休眠感染と関係があるのですか。

Bojesen教授: ある程度は関係しますが、完全にではありません。バイオフィルムとは、定義すると、細菌が粘膜表面に微小なコロニーをつくり、それが成長した表在性の形成物です。細菌の集団が表面に定着し、菌体外基質——タンパク質を多く含むぬるぬるした物質——を分泌します。バイオフィルム内の細菌の一部も休眠状態になります。多くの人はバイオフィルムを分解して取り除こうとし、アセチルシステインをよく使います。これは、風邪をひいて気道に痰が多いときのように、粘液を分解することで知られています。

Petersen博士: 粘液溶解剤（mucolytic）ですね。

Bojesen教授: そうです。アセチルシステインはその点では一定の効果があります。しかし重要なのは、休眠感染は表面だけにあるのではないということです。バイオフィルム内にもあり得ますが、組織の中にも潜んでおり、アセチルシステインは組織内には入り込めません。休眠細菌を活性な状態に戻すこともできません。ですから、アセチルシステインである程度バイオフィルムを分解することはできても、休眠感染を治すことはできないのです。

Martin Hinz: それでも一部の症例では役立ち、牝馬が受胎して、翌年にまた問題が戻ってくる、ということはありますか。

Bojesen教授: この問題の多くは実際には組織の中にあるので、表面だけを処置しても、解決の半分にも達しません。手軽で費用も安く、「何かをしている」という感覚が得られる——おそらく獣医もオーナーも、アセチルシステインを使った後にそう感じるのだと思います。

Martin Hinz: バイオフィルムがあれば、休眠感染もあるのですか。

Bojesen教授: 必ずしもそうではありませんが、同時に存在することは十分にあり得ます。バイオフィルム内に休眠細菌がいることもありますが、それはまだ表面の、比較的表在的な問題であり、組織の深部にある本当の休眠感染とは異なります。

瘢痕組織と免疫系

Bojesen教授: 瘢痕組織は一般的な反応です。慢性感染は常に軽度の炎症を引き起こし、それが瘢痕組織の形成につながることがあります。子宮に瘢痕組織が多いと、妊娠期間を通じて胎子を支えられず、それも牝馬が産駒を得られない原因の一つになります。

Petersen博士: 子宮はまた、胚が育つよう免疫系が抑制された、妊娠に適した環境をつくらなければなりません。そこは細菌にとって格好の隠れ場所です。慢性症例では、子宮内膜の軽度の炎症と、妊娠に必要な環境との間でせめぎ合いが起き、それが妊娠の成立を妨げます。

Bojesen教授: 一部の治療は単に免疫系を抑えるもので、ある程度は理にかなっています。しかし休眠感染がある場合、細菌は除去されず、免疫系を——おそらく過度に——抑え込むだけです。bActivateで活性化するときは、制御された短い炎症を起こして細菌を増殖させ、それから治療します。感染を誘発しますが、すぐに治すので、炎症反応は最小限に抑えられます。

治療プロトコル

Martin Hinz: Morten、bActivateの治療を行うには何が必要ですか。

Petersen博士: とても簡単で、すべて通常の馬の繁殖診療で行える手技です。牝馬が発情期にあるときに、たとえば少量子宮洗浄で子宮からサンプルを採ります。抗菌薬を注入するのと同じように、bActivate 10 mlを注入します。2日後に再び来ます。その2日間に休眠レンサ球菌が活性化して増殖するので、2回目のサンプルで回収できます。その翌日には両方のサンプルの培養結果が出て、存在する細菌の全体像が分かります。あとは、通常の子宮内膜炎と同じように治療します——子宮洗浄を行い、その細菌に感受性のある抗菌薬を投与します。レンサ球菌が、とくに1回目より2回目のサンプルで多く増殖していれば、活性化されたと分かるので、ペニシリンを筋肉内に3日間、全身投与でも治療します。短期・高濃度で、非常に効果的です。

Bojesen教授: 筋肉内と局所の両方で治療します。子宮壁の外側と内側の両方から細菌を叩く必要があるからです。長年にわたる非常に大規模な研究から、レンサ球菌はほぼ常に通常のペニシリンに感受性があるので、広域抗菌薬は必要ありません。

Martin Hinz: ちょうど48時間でなければならないのですか。

Bojesen教授: 24時間後にもサンプルを採りましたが、多くの牝馬は1日目ですでに陽性です。2日後にはわずかに——おそらく10%ほど——増えますが、大半は24時間後にはすでに陽性です。

Kildangan／Godolphin の研究

Martin Hinz: アイルランドでの研究について教えてください。

Petersen博士: これは Godolphin グループに属する Kildangan という大きな種馬牧場で、非常に経験豊富な繁殖獣医 Meta Osborne とともに行いました。彼女は試すことに前向きでしたが、少し懐疑的でもありました。その最初のシーズンに、彼女は19頭の不受胎牝馬——本物の不受胎牝馬で、高価値のサラブレッド、なかには何年も不妊だった牝馬を選び出しました。それらを活性化し、陽性の牝馬を治療しました。19頭中16頭がレンサ球菌陽性で、ペニシリンで治療しました。自然交配で、19頭中14頭が翌年に受胎して産駒を得ました。平均1.1サイクル、ほぼ1サイクルです。彼らが抱えていた最も成績の悪い牝馬の一部だったので、非常に驚くべき結果でした。

再活性化研究と診断の感度

Petersen博士: 治療の有効性についての研究データも得たいと考えました。19頭の活性化陽性の牝馬を特定して治療し、翌サイクルに再び来て、子宮の状態を見るためにもう一度活性化しました。その19頭のうち18頭は増殖がなく、無菌で清浄でした。再び活性化陽性となった1頭だけは、子宮の局所治療のみで、全身治療を受けていませんでした。局所と全身の両方を治療することがいかに重要かを示しています。

Martin Hinz: 標準的なサンプリング法の精度はどの程度ですか。

Bojesen教授: スワブがあまり有効でないことを示すデータは数多くあります。陽性の牝馬が100頭いてスワブを採っても、捕まえられるのは約3分の1だけです。生検培養はより優れていて、約82%を捕まえます（Nielsen 2005）。しかし子宮洗浄や生検でも、休眠レンサ球菌を見つけられることはごくまれです。3つの方法はいずれも細菌が増殖することに依存しているからです。増殖しなければ見逃してしまう——だからこそ bActivate のような活性化培地が必要なのです。

Martin Hinz: それでもなぜ、人々はスワブを使い続けるのですか。

Bojesen教授: 手軽で、安く、オーナーや獣医になじみがあるからです。生検は粘膜を穿刺することになるので、警戒する人もいます——もっとも、馬の粘膜は厚く、害を与えるのは非常に難しいのですが。私たちはスワブより生検や子宮洗浄を強く推奨しますが、休眠レンサ球菌にはやはり活性化が必要です。

予防、そして結び

Martin Hinz: 牝馬を数年の競走生活の後に休ませる前に、きれいな状態に保っておくのは良い考えでしょうか。

Bojesen教授: いつ予防すべきかを正式に研究したことはありませんが、休眠感染が3回の分娩後に明らかに増えることを踏まえると、2回の分娩後に予防的手段として活性化を検討しはじめるのは理にかなっています。活性化治療は子宮内膜を傷めないので、多くの人が今行っているよりも早い段階で、休眠感染の蓄積を防ぐことができます。

Petersen博士: 実際には、何回か分娩した牝馬は5月や6月と遅くに分娩することもあり、その後、秋に休ませます。北半球では8月や9月が、活性化して、細菌の増殖が見られれば治療する絶好の時期で、その空き時間を有効に使えます。

Martin Hinz: さらに詳しくは、YouTubeで「bActivate」「endometritis」を検索するか、bActivateのFacebookページ、そしてbActivateのウェブサイトでご覧いただけます。ご視聴ありがとうございました。また新しいエピソードでお会いしましょう。